TÉCNICAS DE EDICIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS EN COVID-19

Técnica de Edición de Ácidos Nucleicos para SARS-CoV-2

Tipo de Edición: Ex vivo/somática (1).

Dirigido hacia: RNA viral, replicasa-transcriptasa (ORF1ab) y el pico (S) del virus (1).

Dirigido por: RNAs guías (gRNAs)  y CRISPR / Cas13d (1).

Órgano a tratar: Pulmón (1).

Vector: Virus adenoasociado (AAV) puede servir como vehículo para administrar el efector Cas13d a pacientes infectados con 2019-nCov (SARS-CoV-2) (1).

Vía de administración: No específica (1).

Resultados a:

Corto plazo: Este sistema se puede usar para alterar específicamente el genoma del ARN de 2019-nCov (SARS-CoV-2), lo que limita su capacidad de reproducción (1).

Mediano plazo: Se necesitan estudios futuros que determinen la seguridad y eficacia de este sistema para eliminar 2019-nCov (SARS-CoV-2) y otros virus en modelos animales para poder lograr la aplicación terapéutica a los pacientes (1).

Largo plazo: Si se demuestra que es eficaz, este enfoque terapéutico proporcionará a los pacientes de todo el mundo más opciones para luchar contra virus potencialmente mortales como el SARS-CoV-2 que tienen el potencial de evolucionar y desarrollar resistencia rápidamente (1).

Referencia Bibliográfica:

1. Nguyen TM, Zhang Y, Pandolfi PP. Virus against virus: a potential treatment for 2019-nCov (SARS-CoV-2) and other RNA viruses. Cell Res [Internet]. 2020 [citado el 27 de febrero de 2021]; 30: 189–190. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41422-020-0290-0

TERAPIA CON STEM CELLS PARA TRATAR COVID-19

 Terapia con Células Madre Mesenquimales de Cordón Umbilical Humano para COVID-19

Tipo de Stem Cell: Células madre mesenquimales de cordón umbilical humano (hUCMSC) (1).  

Método de obtención: El cordón umbilical se obtuvo de placenta humana a término de un donante sano por cesárea (1). Las hUCMSC se aislaron y luego se sembraron en matraces de 25 cm2 y se mantuvieron en un medio de cultivo (1). Posteriormente se lavaron, recolectaron y criopreservaron en dimetilsulfóxido al 10% (1). Antes de la administración, las células crioconservadas se descongelaron, se lavaron para eliminar el dimetilsulfóxido y se resuspendieron en una solución salina al 0, 9% suplementada con albúmina humana al 5% (1).   

Vía de administración: Vía Intravenosa (IV) (1).

Resultados a:

Corto plazo: Reacción inflamatoria pulmonar se alivia en gran medida (1). Paciente es trasladado fuera de la UCI y la mayoría de los signos vitales y los índices de laboratorio clínico se recuperan al nivel normal (1). Los recuentos de linfocitos T CD3 + , linfocitos T CD4 + y linfocitos T CD8 + aumentaron notablemente hasta el nivel normal, lo que indica la reversión de la linfopenia (1). Paciente es dado de alta del hospital después de la recuperación (1).

Referencia Bibliográfica:

1. Liang B, Chen J, Li T, Wu H, Yang W, Li Y, Li J, Yu C, Nie F, Ma Z, Yang M, Xiao M, Nie P, Gao Y, Qian C, Hu M. Clinical remission of a critically ill COVID-19 patient treated by human umbilical cord mesenchymal stem cells: A case report. Medicine (Baltimore) [Internet]. 2020 [citado el 20 de febrero de 2021]; 99 (31): e21429. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7402800/

ANIMAL TRANSGÉNICO PARA COVID-19 - VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS TRANSGÉNICOS

 RATONES TRANSGÉNICOS hACE2 PARA SARS-CoV-2

Tema: La patogenicidad del SARS-CoV-2 en ratones transgénicos hACE2 (1).

Tipo de animal transgénico: Ratones transgénicos hACE2 Knock in (1).

Método por el que se obtuvo: Microinyección del promotor Ace2 de ratón que conduce la secuencia codificante de ACE2 humana en los pronúcleos de óvulos fertilizados de ratones ICR, y luego se identificó mediante PCR la ACE2 humana integrada (1).

Usos que se les ha dado: Usados para evaluar agentes terapéuticos antivirales y vacunas, así como para comprender la patogenia de COVID-19 (1).

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS TRANSGÉNICOS

VENTAJAS

1. Es posible utilizar a modo de fármacos algunas proteínas provenientes de organismos transgénicos, proteínas recombinantes, para tratar distintas enfermedades (2).

2. Emplear animales de granja, por ejemplo, cabras transgénicas para producir el activador tisular del plasminógeno, utilizado para tratar la trombosis (2).

3. Plantas transgénicas pueden usarse para crear proteínas farmacéuticas, sobre todo anticuerpos destinados al tratamiento de infecciones o proteínas para elaborar vacunas contra virus y bacterias patógenas (2).

4. Creación de vacunas comestibles a partir vegetales transgénicos (2).

5. Mejoras de la calidad nutricional a través de organismos modificados genéticamente, como es el caso del arroz dorado rico en beta-caroteno, un precursor de la vitamina A, que ayuda a prevenir enfermedades y a evitar la ceguera (2).

DESVENTAJAS

1. La transferencia de genes puede traspasar alérgenos generando alergias en los individuos que consuman el OMG (Organismo Modificado Genéticamente) (2).

2. Al provocar una alteración del material genético de los OMG podría aumentarse la producción de ciertas toxinas o la expresión de las mismas en lugares en los que anteriormente no se encontraban, dando lugar a la toxicidad (2).

3. Al ser ingeridos alimentos transgénicos los genes de resistencia a antibióticos pueden pasar a los seres humanos dificultando el tratamiento de las enfermedades infecciosas (2).

4. El consumo de ciertos organismos modificados genéticamente podrían afectar a la fertilidad. (2).

5. Se cree que los genes introducidos en las plantas se pueden incorporar en el material genético de los consumidores (2).

Referencias Bibliográficas:

1. Bao L, Deng W, Huang B, Gao H, Liu J, Ren L, Wei Q, Yu P, Xu Y, Qi F, Qu Y, Li F, Lv Q, Wang W, Xue J, Gong S, Liu M, Wang G, Wang S, Song Z, Zhao L, Liu P, Zhao L, Ye F, Wang H, Zhou W, Zhu N, Zhen W, Yu H, Zhang X, Guo L, Chen L, Wang C, Wang Y, Wang X, Xiao Y, Sun Q, Liu H, Zhu F, Ma C, Yan L, Yang M, Han J, Xu W, Tan W, Peng X, Jin Q, Wu G, Qin C. The pathogenicity of SARS-CoV-2 in hACE2 transgenic mice. Nature [Internet]. 2020 [citado el 13 de febrero de 2021]; 583 (7818): 830-833. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32380511/

2. Luque Polo K. Seguridad alimentaria y alimentos transgénicos. Obs. Medioambient [Internet]. 2017 [citado el 13 de febrero de 2021]; 20: 59-75. Disponible en: https://revistas.ucm.es/index.php/OBMD/article/download/57946/52140/

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL PARA COVID-19 Y ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

ADN recombinante artificial en SARS-CoV-2

Tema: Rescate del SARS-CoV-2 de un cromosoma artificial bacteriano único (1).

Objetivo: Facilitar el estudio del SARS-CoV-2 y el desarrollo de profilácticos y terapéuticos para el tratamiento de COVID-19 (1).

Gen o secuencia a clonar: ARN viral del SARS-CoV-2 USA-WA1 / 2020 con 29,903 nucleótidos basado en el uso de un cromosoma artificial bacteriano (BAC) se obtiene ADNc infeccioso (1). 

Enzimas de restricción: Kasl, Pacl, Mlul, BstBl, BamHl (1).

Enzima ligasa: No específica (1).

Vector: pBeloBAC11 (1).

Célula receptora: Células Vero E6 (1).

Mecanismo de transferencia o inserción del gen: Transfección (1).

Métodos de identificación de clones: Cultivo, secuenciación, ensayo de inmunofluorescencia (IFA), ensayo de placa e inmunotinción y RT-PCR (1).

ADN recombinante en la naturaleza

La recombinación en la naturaleza se puede ver presente en las bacterias, las mismas que para cambiar su dotación genética realizan la transferencia de fragmentos de ADN de unas a otras con la posterior recombinación de los fragmentos adquiridos en el cromosoma o en los plásmidos de las bacterias receptoras (2). En la recombinación de tipo homóloga el fragmento de ADN aceptado es muy similar a una parte del genoma de la bacteria y, tras situarse al lado, se intercambia con él por un mecanismo de rotura, entrecruzamiento y reunión de sus cadenas de ADN (2). La transferencia previa a este tipo de recombinación puede ocurrir mediante: transformación, transducción o por conjugación (2). En el caso de la recombinación no homóloga los transposones o integrones pueden integrarse en diversos puntos del cromosoma o en los plásmidos de una bacteria sin necesidad de encontrar fragmentos homólogos (2).

Referencias Bibliográficas:

1. Ye C, Chiem K, Park JG, Oladunni F, Platt RN 2nd, Anderson T, Almazan F, de la Torre JC, Martinez-Sobrido L. Rescue of SARS-CoV-2 from a Single Bacterial Artificial Chromosome. mBio [Internet]. 2020 [citado el 06 de febrero de 2021]; 11 (5): e02168-20. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32978313/

2. Celis Bustos, Yamile Adriana, Rubio, Vivian Vensa, Camacho Navarro, María Marcela, Perspectiva histórica del origen evolutivo de la resistencia a antibióticos. Revista Colombiana de Biotecnología [Internet]. 2017 [citado el 06 de febrero de 2021]; 19 (2): 105-117. Disponible en: https://www.redalyc.org/pdf/776/77654661011.pdf